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等位基因以外的额外峰的分析

2016-11-03 13:53 作者: 来源: 本站 浏览: 我要评论 字号:

摘要: 无论什么案件,无论什么方法,共同关心的问题是案件的结论,如果对分析系统了解不深入,同样的实验结论可能存在差异。单一一个STR基因座的PCR扩增结果一般是:纯合子个体只有一个带或者一个峰,杂合子个体拥有两个大小不同的带或峰,出现第三条带或峰被称为额外带或者峰...

等位基因以外的额外峰的分析

无论什么案件,无论什么方法,共同关心的问题是案件的结论,如果对分析系统了解不深入,同样的实验结论可能存在差异。单一一个STR基因座的PCR扩增结果一般是:纯合子个体只有一个带或者一个峰,杂合子个体拥有两个大小不同的带或峰,出现第三条带或峰被称为额外带或者峰。荧光标记自动分析结果以一个个荧光峰表示等位基因片段,在试剂操作中额外峰主要有以下几类:

1,Stutter带,是指在分析结果时出现的比其主带短一个重复位置的带。原因可能是在复制过程中TaqDNA聚合酶的滑动。一些STR基因易出现Stutter带,这与序列有关,复制滑动在二核苷酸STR基因座多见。在复合扩增时,由于扩增反应条件不是每个基因座的最佳条件,容易出现Stutter带。较大的等位基因的Stutter带百分比要比较小等位基因大。

2,Pull-up峰,多色荧光标记检测系统中,由于有机荧光染料发射光谱较宽,不同荧光之间相互干扰,产生的干扰峰,称为pull-up峰。不过这种峰形和真正的等位基因峰不同,且出现的位置与另一颜色的峰位置一致,较易分开。

3,非产物荧光污染,一些具有荧光物质如抗生素、维生素、多环芳香物、荧光素发生体和燃料等的电泳图中出现DNA荧光片段相同的峰,可能会干扰DNA分型,影响鉴定结果。

4,微变异与稀有等位基因,由于碱基插入、缺失或者变化造成等位基因序列差异,一些重复单位碱基数发生变化,等位基因内部有不完全的重复单位存在,这些微变化与完整重复单位的等位基因差异极其微小,而且比较稀有,不包含在分型标准物中,与分型标准物中等位基因只差一到两个基因。D18S51、D21S11和FGA基因座出现微变化较多,“1”“2”“3”很难辨认们很难进行确切命名,如果命名不正确,会导致结果错误。

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