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DNA亲子鉴定两种酶的添加

时间:2017-04-13|来源:华曦亲子鉴定中心

Taq DNA聚合酶具有类似DNA末端转移酶(TdT)的功能,可在新合成双链产物的3,末端加上一个非模板依赖的碱基,使PCR产物3’一端经常有额外的碱基,通常称之为非模板添加物。DNA亲子鉴定理论上四种碱基均可被添加到3’端,但Taq DNA酶对dATP的聚合能力远远高于其它三种dNIP,PCR产物3’端的非模板添加以腺嘌呤(adenine)为主,称为A添加,这种非模板添加导致PCR产物比真正目的序列多lbp。在PCR扩增中最后一步60℃或72℃保温有利于A的添加,而且加A的程度取决于模板链的序列与反向引物的5,端序列。有人发现引物5’端为G,利于聚合酶的A添加。因此引物序列不同,每个基因座的腺化比例稍有差异。

如果DNA亲子鉴定PCR产物部分腺化,而不是全部加A,使每个等位基因有大小相差lbp的二个片段(“n”和“n+l”带,n为全长等位基因,n+l带为等位基因+l,或表达为+A/ -A),肩膀峰(shoulder peak)或为裂开的峰(split peak)。“n”和“n+l”带的存在增加分型复杂性,无法区分是差lbp的二个真正等位基因还是不完全腺化造成的“n”和“n+l”带,比如,TH01基因座的等位基因10没有腺化的片段长度与等位基因9.3腺化的长度相同。因此要求所有PCR产物要么加A,或要么都不加A。

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