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亲子鉴定中心引物的用量及其计算

时间:2017-04-11|来源:华曦亲子鉴定中心

亲子鉴定中,一般PCR反应中引物的终浓度为0.1- lymol/L,在此范围内,PCR产物量基本相同。引物低于0. lymol/L时,则产量降低。引物浓度过高会促进引物的错误引导合成非特异产物,增加引物二聚体的形成。如果错配或引物二聚体出现在早期的循环中,也成为PCR反应的模板,与靶序列竞争DNA聚合酶、dNTP底物,从而使靶序列的扩增量降低。不同的反应引物的最适浓度也不同,亲子鉴定教您最好选用几种不同浓度实验再作调整,尽可能降低引物浓度,对整个PCR反应是有益的。

摩尔消光系数(EM)是1cm光程比色杯中测定Imol/L寡核苷酸溶液在UV260。。下的光密度(OD)值。EM可按下式计算:

EM =a (16 000)+b(12 000) +c(7 000) +d(9 600)

其中,a、b、c和d分别代表寡核苷酸中A、G、C和T的个数。

例如:一纯化的20mer寡核苷酸溶于0.Iml水中,取iorli稀释至l.Oml,测其OD=0.50.则

原液的OD为0.50x 100= 50,若此寡核苷酸碱基组成为A=5,G=5,C=5,T=5,其EM为:

EM =5 (16 000) +5 (12 000) +5(7 000) +5(9 600)=223 000原液中寡核苷酸的摩尔浓度为:50÷223 000= 2.9×10 -4mol/L= 290nmol/L也可以用小卫星-PCR章节介绍的方法计算。

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